hPROKR2受体C末端相互作用蛋白的筛选与功能研究

【摘要】G蛋白偶联受体(G-proteincoupledreceptors,GPCRs)是迄今发现最大的受体超家族,其家族成员超过1000个。GPCRs一般包括7个跨膜区,3个细胞内环区(IL1-3)和位于胞浆的C末端。几乎所有细胞都表达种类多样的GPCRs,它们与配体结合后激活G蛋白,从而启动不同的信号通路并引起各种生物学效应。GPCRs不仅能与G蛋白相互作用,也与一些称做GPCRs互作蛋白(GPCRinteractingproteins,GIPs)的辅助蛋白相互作用。GIPs非常丰富,包括跨膜蛋白、离子通道、离子型受体、单次跨膜蛋白以及多种可溶性蛋白。这些蛋白质参与GPCRs的转运、靶向归巢、信号传导以及变构调节等。GIPs中较多的是与GPCRs的C末端相互作用。PROKR2属于GPCR家族成员之一,与相应配体一PK1或PK2结合后,可参与平滑肌收缩、血管生成、近日节律调节、以及促进神经干细胞迁移。最近的遗传学研究表明PROKR2的突变与卡尔曼综合征(KallmannSyndrome,KS)以及特发性促性腺激素型性腺功能减退(Isolatedhypogonadotropichypogonadism,IHH)发病有关。KS和IHH表现为青春发育延迟和不孕。因此,研究与PROKR2相互作用的蛋白,不仅可以增强对PROKR2功能调节的了解,而且可以促进一些KS/IHH目关基因的发现。在本研究中,我们利用酵母双杂交技术,以人PROKR2的C末端(333-384aa)为饵,从人cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白。我们首先获得了8个有意义的cDNA克隆,从中我们选取SNAPIN进行进一步的研究。我们通过GSTpulldown和免疫共沉淀实验不仅证实了PROKR2与SNAPIN的相互作用,而且发现SNAPIN也可以与PROKR2的同源蛋白PROKR1的C末端相互作用。进一步的研究表明SNAPIN中包含aa37-136的片段为相互作用所必须,该区域包含H1和H2两个α螺旋区。而PROKR2的C-末端的343YFK345和351HWR353是相互作用所必须。免疫共沉淀实验显示,将343YFK345和351HWR353突变成丙氨酸之后得到的突变受体6A-PROKR2不能与SNAPIN相互作用。PROKR2与配体结合之后导致受体内吞,去掉配体之后,受体又可以迅速返回细胞膜。由于SNAPIN参与细胞内的囊泡运输,我们推测SNAPIN与PROKR2的相互作用可能参与了受体的内吞或者重新上膜。RNA干扰内源性SNAPIN之后,PROKR2的内吞不受影响,但是受体重新上膜受到抑制。相应地,受体降解速度增加。这些现象也在SNAPIN结合缺陷的6A-PROKR2得到验证。因此,我们的结果显示SNAPIN促进了PROKR2的重新回膜。本研究得出以下结论：(1)通过酵母双杂交、GSTpulldown以及免疫共沉淀,我们筛选到一个PROKR2相互作用蛋白-SNAPIN;(2)SNAPIN的相互作用区域位于aa37-136.其中包含H1和H2两个α螺旋区；(3)PROKR2的C-末端的343YFK345和351HWR353是其与SNAPIN相互作用所必需。YFK与HWR均为两个芳香族氨基酸,紧接一个碱性氨基酸。(4)功能学研究表明SNAPIN有助于PROKR2内吞之后的重新上膜。
【作者】周晓涛；
【导师】苏冰；李家大；
【作者基本信息】中南大学，基础医学，2013，博士
【关键词】G蛋白偶联受体；酵母双杂交；hPROKR2；SNAPIN；G蛋白偶联受体互作蛋白；

【参考文献】
[1]赵道捷.天津港口的五大优势[J].城市.1989(02)
[2]宋阳超.@新周刊新浪微博的品牌营销策略研究[D].河北大学,新闻与传播,2014,硕士.
[3]张鑫.三步序贯法对激素依赖型哮喘患者TGF-β1/Smad信号通路的调控作用[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[4]冒慧敏.单纯血尿型IgA肾病血尿程度与临床指标、病理及中医证候的相关性[D].北京中医药大学,中医学,2014,硕士.
[5]张辉,张浩,陆剑峰.SVM在数据挖掘中的应用[J].计算机工程,2004,06:7-8+24.
[6]周娇鸣.血清激活素A和MLHFQ评分在慢性心力衰竭患者中的临床意义[D].大连医科大学,心血管内科学,2012,硕士.
[7]宋燕鹏.晋东南二仙信仰在唐宋时期的兴起——以碑刻资料为中心[J].社会科学战线,2014,11:102-111.
[8]樊丹.高中生语篇能力与英语阅读理解的相关性研究[D].沈阳师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[9]张天放.双语沟通法对小学聋生学业自我概念的影响研究[D].辽宁师范大学,特殊教育学,2011,硕士.
[10]邵伟钰.地方政府债务问题研究[D].苏州大学,财政学,2003,硕士.
[11]郭伟,包逸萍.杭州光伏产业专利分析及对策研究[J].中国科技信息,2014,05:29-32.
[12]戴卫平.影响优秀羽毛球男子单打选手攻守能力的技战术因素分析[D].北京体育大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[13]李闯.证券公司雇员团队合作的组织绩效实证研究[D].辽宁大学,企业管理,2012,硕士.
[14]刘盾,袁伦渠,林玳玳.资本主义经济和经济学的双重危机与重构:历史唯物主义的视角[J].经济学家,2013,07:5-16.
[15]马庆.基于Kinect的实时人体动画合成及重定向技术研究[D].浙江工业大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[16]张蕾.《智取威虎山》中冲突话语的衔接手段研究[D].北京林业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[17]王龙,马建军,林柏梁,陈雷,温旭红.铁路货运机车动态周转与运用优化方法研究[J].铁道学报,2014,11:7-15.
[18]宋小燕.修饰蛋白石次序吸附染料及重金属特性研究[D].大连理工大学,化学工程,2013,硕士.
[19]肖怡.商业企业战略选择与信息技术[J].江苏商论,2002,02:43-45.
[20]欧阳翎.广西黑衣壮族村落与建筑研究[D].广东工业大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[21]赵紫玉,徐金安,张玉洁,刘江鸣.日语时间表达式识别与日汉翻译研究[J].北京大学学报(自然科学版),2014,01:180-186.
[22]孔贤.高速渐开线斜齿圆柱齿轮齿廓修形技术研究[D].南京农业大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[23]杨丽琳.我国民办高等教育政府管制问题研究[D].江西财经大学,产业经济学,2004,硕士.
[24]唐全.受氯代苯酚污染水体沉积物厌氧生物修复的应用基础研究[D].浙江大学,环境工程,2004,硕士.
[25]朱凯.人的现实自由之路[D].中共四川省委党校,马克思主义哲学,2012,硕士.
[26]任萍萍.氧化铝基复合陶瓷的制备和性能测试[D].合肥工业大学,材料学,2004,硕士.
[27]姜姗.基于灰色关联分析法的航运企业船舶融资风险评价研究[D].哈尔滨工业大学,技术经济及管理,2014,硕士.
[28]赵成见.网络零售市场中的信息共享行为及其激励机制研究[D].浙江工商大学,产业经济学,2013,硕士.
[29]韩峰.实时成像多核计算系统设计及大点数FFT优化[D].南京大学,集成电路工程（专业学位）,2013,硕士.
[30]张杏红.新型GnRH疫苗的构建及免疫效力研究[D].南京农业大学,基础兽医学,2009,硕士.
[31]王慧.炭气凝胶的制备及对膨胀石墨基双极板的改性研究[D].哈尔滨工业大学,分析化学,2014,硕士.
[32]鞠楠.延边天宝山矿集区立山多金属矿床的矿床成因与构造背景[D].吉林大学,矿物学岩石学矿床学,2013,硕士.
[33]李纯.2011年湖南省司法鉴定精神障碍者社会危害行为特征及其鉴定后处置现状[D].中南大学,临床医学,2013,博士.
[34]张瑞晨.夫妻离婚股权分割问题研究[D].兰州大学,民商法（专业学位）,2013,硕士.
[35]王保安.管式炉Ⅱ段焦油出口温度调节系统的改进[J].冶金自动化,1982,01:29-33.
[36]李长林,唐明.离心甩油燃烧室计算方法研究[J].西北工业大学学报.1992(02)
[37]罗宇.缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制[D].苏州大学,药理学,2013,硕士.
[38]卢卫芳.绝缘体上锗（GOI）纳米带的制备及其应变机理研究[D].厦门大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[39]杨琦.如何应对受害人补偿需要对刑事司法的不当干扰[D].吉林大学,法律,2014,硕士.
[40]董静.纸币鉴伪系统设计与磁图像特征识别方法研究[D].北方工业大学,控制工程,2014,硕士.
[41]刘梦姣.POSS基聚合物超疏水杂化纤维的制备与表征[D].浙江大学,化学工程,2013,硕士.
[42]冯薇.扩展覆盖的无线中继网及全双工中继技术研究[D].南京邮电大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[43]王娟.高中语文学习动力探究[D].信阳师范学院,学科教学,2014,硕士.
[44]李大筠.TTS在办公系统的研究与开发[D].青海师范大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[45]王玉宁.海上保险条款的法律规制研究[D].大连海事大学,海商法,2014,硕士.
[46]刘超.胸段食管鳞癌淋巴结转移规律及其影响因素分析[D].郑州大学,肿瘤学（专业学位）,2013,硕士.
[47]孟晓春.Word与Adobe Acrobat PDF文档的水印算法研究[D].西安科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[48]孟圆圆.2011年西安世界园艺博览会标识系统研究[D].陕西科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[49]都松阳.周恩来人民群众观研究[D].西安科技大学,马克思主义中国化研究,2014,硕士.
[50]雷云.基于单周期控制的三相VIENNAPFC电路设计[D].西安科技大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.